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          技術文章

          如何正確對DNA提取試劑盒進行保存和操作?

          技術文章
            DNA提取試劑盒是根據氯化芐法構建的,能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。C7H7Cl具有能將含有纖維素等的細胞壁中的羥基芐基化,從而破壞細胞壁的特性。
           
            DNA提取試劑盒的保存方式:
           
            室溫。低溫保存可能會有沉淀析出。如果發生析出現象,請于50℃溶解后,再于室溫保存。
           
            DNA提取試劑盒的操作方法:
           
            全套操作約需1小時,分勻漿、細胞裂解、除蛋白、DNA純化等步驟,詳細說明如下。
           
            勻漿和細胞裂解:
           
            使用不同的實驗材料需采用不同的勻漿步驟,具體說明如下:
           
            【從動物組織中提取基因組DNA】
           
            使用研缽進行勻漿時:
           
           ?、?取1~100 mg的動物組織或人組織移入冰浴預冷的研缽中,快速用力展研成勻漿。
           
            注)下列組織請加液氮研磨至粉末狀。
           
            A.富含DNA酶的胰臟、脾臟、胸腺、淋巴等組織。
           
            B.富含膠原蛋白的皮膚、肌腱等組織。
           
            C.富含角質蛋白的組織或堅硬的組織(如骨骼)等。
           
           ?、?加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1,溫和研磨30秒鐘。
           
            注)使用上述①-注)的實驗材料時,請在加入Solution A及RNase A1后,將研缽置于65℃水浴上研磨1分鐘。
           
           ?、?收集650 μl研磨好的組織勻漿液移至Collection Tube中。如果勻漿體積不足650 μl,請補充Solution A至650 μl,65℃保溫5分鐘。
           
            使用研磨棒進行勻漿時:
           
           ?、?取1~100 mg的動物組織或人組織移入冰浴預冷的Collection Tube 中,用研磨棒快速研磨成糊狀。
           
           ?、?加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成勻漿。
           
           ?、?加入350 μl的Solution A將研磨棒上的勻漿沖入Collection Tube中,充分振蕩混合后,65℃保溫5分鐘。
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